Screening-ul microbian de baza a fost folosit pentru identificarea agentilor antimicrobieni, de exemplu agentii citotoxici anticancerigeni. Biotehnologia a facut posibila clonarea unor proteine tinta si selectarea in vitro a unor sisteme celulare, dar unele sisteme nu si-au manifestat in aceste conditii intreaga lor activitate.
Aceste sisteme celulare au avut nevoie de alte modificari chimice, pentru reglarea permeabilitatii peretelui celular si pentru a-si manifesta activitatea selectiva asupra proteinelor tinta.
Sistemele celulare mimeaza mediul natural al proteinelor tinta, proteinele comportandu-se chiar mai bine in acest mediu artificial.
Multe afectiuni implica interactiuni ale complexelor proteice, unele interactiuni fiind incomplet cunoscute. Aceste interactiuni proteice pot fi mai bine observate in sistemele celulare in vitro, decat in celulele libere analizate.
In ultimii ani s-a observat ca screening-ul celular furnizeaza avantaje semnificative, care permit o dezvoltare rapida a sintezei medicamentelor.
Desi multe enzime pot sa fie clonate si utilizate pentru a produce mari cantitati de proteine, nu este intotdeauna usor de furnizat o cantitate suficienta de enzime pentru a fi folosite in screening-ul de inalta selectivitate.
Un dezavantaj al acestei metode, folosind celule de mamifere, este obtinerea conditiilor favorabile de crestere a celulelor, astfel incat sa se produca cantitati necesare de celule pentru screening.
Pretul crescut si dificultatea obtinerii unui numar mare de celule pot fi reduse folosind sisteme miniaturizate. Sistemele miniaturizate pot contine mai multe tipuri de celule; in plus daca nu exista interactii intre tintele urmarite, pot fi analizate mai multe tinte diferite, utilizand acelasi sistem, pastrand costul la acelasi nivel.
Se pot testa medicamente tinta prin screening celular, fara a cunoaste toate interactiile proteice necesare activitatii celulei, de exemplu: interactia proteinelor pe caile biochimice sau metabolice, activatorii sau inhibitorii transcriptiei. Screening-ul microbian de baza Biotehnologia a facut posibila proiectarea genelor proteinelor mamiferelor in sistemele microbiene.
Proteinele obtinute in acest fel sunt folosite fie pentru analize biochimice si structurale, fie sunt utilizate in clinica. Proteinele se gasesc in incluziuni corpusculare, pentru a fi activate sunt izolate, solubilizate si repliate. O serie de proteine care necesita modificari posttranslationale (de ex.: glicozilare) nu se obtin in sisteme celulare, dar aceasta nu constituie o piedica a testelor screening.
Glicozilarea este necesara in celulele mamiferelor pentru stabilitatea proteinelor si pentru transport. Sistemele microbiene ofera avantaje semnificative dezvoltarii si raspandirii screening-ului celular, deoarece aceste sisteme sunt ieftine, usor de crescut si manipulat si deoarece proteinele mamiferelor pot fi usor clonate si exprimate in ele.
Permeabilitatea celulelor Un ...
Pentru a descărca acest document,
trebuie să te autentifici in contul tău.
