Enterokinaza

ENZIMOLOGIE = Ramura a biochimiei care se ocupa cu studiul enzimelor si al modului lor de actiune, bazat pe folosirea metodelor biochimice si histochimice, care permit stabilirea structurilor moleculare si localizarea lor in celule si tesuturi. Enzimele sunt molecule biologice deosebit de importante pentru lumea vie, avand rol catalic bine definit prin accelerarea vitezei reactiilor chimice. Propietatea lor cea mai importanta, care le deosebeste categoric de catalizatorii chimici este specificitatea fata de substratul asupra caruia actioneaza, dar si asupra reactiei pe care o catalizeaza. .Fara enzime , procesele biochimice s-ar desfasura cu viteze foarte mici. Enzimele au rol fundamental in reglarea proceselor de crestere si regenarare tisular. Numarul enzimelor este de ordinul miilor caci, in lumea vie, fiecarei molecule organice, existente aici, trebuie sa-i corespunda cel putin o enzima, care sa participe la sinteza si/sau degradarea ei. Clase de enzime: 1.Oxidoreductaze = Oxidare sau reducere a unor molecule; 2.Transferaze = Transfer al unor grupari functionale intre doua molecule 3.Hidrolaze = Hidroliza 4.Liaze = Scindare/eliminare nehidrolitica,cu formarea unor duble legaturi 5.Izomeraze = Conversia unui izomer in celalalt 6. Ligaze = Legare a doua molecule,cuplata cu hidrolaza Enterokinaza (EC 3.4.4.8) reprezinta enzima digestiva secretata de mucoasa intestinului subtire, care activeaza tripsinogenul pancreatic in tripsina activa. In lipsa ei nu se face digestia intestinala a proteinelor.

Fig1.Structura de cristal a Enteropeptidazei cu un inhibitor. http://en.wikipedia.org/wiki/Enteropeptidase

Capitolul I : Caracteristicile enterokinazei

Enteropeptidaza a fost descoperita de catre Ivan Pavlov, caruia i-a fost acordat in 1904 Premiul Nobel pentru pentru studiile sale de Fiziologie gastro-intestinale. Este prima enzima cunoscuta pentru a activa alte enzime. Enterokinaza (EC 3.4.4.8) face parte din clasa hidrolaze, actionand asupra legaturilor peptidice. Enteropeptidaza este tip II transmembranara serin proteaza (TTSP) localizata pe marginea periei mucoasei duodenale si jejunale si sintetizata ca si zimogen. Este o glicoproteina continand 35% carbohidrati.Are specificitate mare. Greutate moleculara: 147,000-150,000 heterodimer format din 115-135 kD si 35-47 subunitati kD. Inhibitor: tripsina de soia. Tripsina este sintetizata si secretata de catre pancreasul exocrine sub forma zimogenului sau - tripsinogen. Conversia acestuia in enzima active este initiata de enterokinaza,enzima secretata in sucul intestinal dupa care procesul continua autocataltic in sensul ca primele molecule de tripsina formate catalizeaza transformarea a noi molecule de tripsinogen.Procesul de conversie a tripsinogenului in tripsina active consta in scindarea hidrolitica a legaturii peptidice Lys6-Ile7 din molecua zimogenuli cu eliberarea hexapeptidei Val-(Asp)4-Lys situate la extremitatea N-terminala a catenei polipeptidice.Aceasta reactie este activate de ionii de calciu .

Fig 1.1 http://2012books.lardbucket.org/books/introduction-to-chemistry-general-organic-and-biological/s21-amino-acids-proteins-and-enzym.html

Capitolul II: Metode de determinare a activitatii enzimatice

II.1.Principiul metodei

Se adauga aproximativ 5,0 unitati de enterokinaza per ug de proteina de fuziune. Digestia trebuie efectuata in tamponul apos utilizata pentru diluare. Se amesteca si se incubeaza amestecul de digestie la 37 ? C pana a doua zi.Enterokinaza poate fi indepartat prin filtrarea gelului sau afinititatea cromatografiei in functie de natura proteinei de fuziune.