Etalarea materialelor biologice intr-un sigur strat este o tehnica rapida prin care se pot studia individual celule intregi.Este cea mai potrivita metoda cand se doreste studierea dinamicii celulare; spre deosebire de metoda sectiunilor fine in care celulele sunt fixate si apoi sectionate, prin metoda etalarii materialului biologic pot fi realizate si preparate proaspete, cu celule in stare vie.
Frotiu de sange este un preparat permanent, fixat si colorat prin tehnici de colorare obisnuite sau speciale, cea mai des folosita fiind tehnica May Grunwald Giemsa.
Materiale necesare:
-lame obisnuite degresate (se spala cu apa si detergent, apoi se degreseaza cu alcool-eter)
-lame rodate
-ace sterilizate
-manusi de protectie
-alcool, tampoane de vata
-hartie de filtru
-stativ pentru asezarea lamelor
Efectuarea frotiului:
1. Recoltarea sangelui
-La adult se face prin punctionarea partii laterale a pulpei mediusului sau inelarului de la mana stanga. Se dezinfecteaza pulpa degetului cu un tampon de vata imbibat in alcool, se punctioneaza locul dezinfectat cu un ac steril, avand grija sa se perforeze numai pielea, fara a se patrunde prea mult in adancime.
-Se sterge prima picatura de sange aparuta la locul intepaturii, prin tamponare cu o hartie de filtru, deoarece contine prea mult lichid interstitial si impuritati de pe piele. La noul nascut si la copilul mic, locurile de punctie sunt: tegumentul lobului urechii si pielea calcaiului.
2. Efectuarea frotiului permanent
-A doua picatura se recolteaza cu marginea mica a unei lame rodate si se aplica pe una din extremitatile unei lame portobiect, asezata orizontal pe o suprafata plana. Pentru recoltarea celei de a doua picaturi, se poate chiar exprima (stoarce) pulpa degetului, deoarece in rezultatul final formula leucocitara si aspectul morfologic al elementelor figurate sanguine nu sunt influentate de cantitatea de plasma.
-Cu lama slefuita pe a carei latura mica s-a recoltat picatura de sange, se imprima picaturii cateva miscari de lateralitate pe o lama portobiect, pentru ca sangele sa se intinda pe toata linia de contact. Se imprima apoi lamei rodate o unica miscare de translatie in lungul lamei portobiect. Se recomanda ca unghiul realizat intre cele doua lame sa fie de 30-35 grade
3. Fixarea frotiului permanent
Se realizeaza prin :
-metode fizice- uscare (desicare) la temperatura camerei, prin agitarea lamei pentru a se obtine o uscare rapida (uscarea lenta duce la ratatinarea celulelor).
-metode chimice- cu alcool metilic timp de 2 minute sau alcol etilic si eter in parti egale, timp de 5-15 minute.
Executarea unui frotiu permanent corect depinde de :
--marimea picaturii de sange
--unghiul dintre lama rodata si lama portobiect sa fie de 30-35 grade
--viteza de intindere : la viteza mare se obtin frotiuri groase.
Documentul este oferit gratuit,
trebuie doar să te autentifici in contul tău.
